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            成年小鼠關節軟骨細胞原代培養

            簡要描述:成年小鼠關節軟骨細胞原代培養:傳統培養方法體外培養的軟骨細胞經長時間傳代培養后往往去分化為成纖維細胞,導致細胞數量及活性下降.如何避免培養過程中的去分化問題,是模擬體內軟骨內成骨軟骨發育過程的關鍵.

            • 更新時間:2024-03-22
            • 瀏覽次數:44

            詳細介紹

            成年小鼠關節軟骨細胞原代培養


            1. C57小鼠,8-10周,通過頸椎脫位處死,浸入75%乙醇浸泡5分鐘,轉移到通風柜中的解剖盤中。

            2. 使用眼科剪和鑷子,使髖關節脫臼,保持股骨頭完整。

            3. 用止血qian去除每個股骨頭的軟骨帽,將組織放入含2%雙抗的PBS中。

            4. 用冰冷的含2%雙抗的PBS清洗2-3遍,將關節軟骨小心移到2ml離心管中。

            5. 用眼科剪dao將軟骨帽剪成約1mm3的碎片,加入3ml預熱的Collagenase D1.5mg/ml)。

            6. 放入37℃、80rpm的搖床中進行第一次消化,時間2h 。

            7. 第一次消化結束后,加入含血清的培養基終止消化,40um的細胞篩過濾后,離心1500rpm,2min。

            8. 沉淀用DMEM完quan培養基重懸,計數,種植在24孔板中。

            9. 在未消化的組織中加入3ml預熱的Collagenase D,放入37℃、80rpm的搖床中進行第二次消化,時間2h,然后收集細胞。


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